dns还原糖

1、定义及原理

定义：DNS即二硝基水杨酸，DNS还原糖测定法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量。

原理：还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖，DNS与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

2、DNS试剂的制备

甲液：溶解6.9克苯酚于15.2毫升10%氢氧化钠溶液中，并稀释至69毫升，在此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。

乙液：称取255克酒石酸钾钠，加到300毫升10%氢氧化钠溶液中，再加入880毫升1%的3,5二硝基水杨酸溶液。

丙液：取乙液定容至1000毫升。

DNS试剂：取5.31毫升甲液与44.69毫升丙液混合即得DNS试剂（随配随用）。

3、葡萄糖标准曲线的绘制

先制作不同浓度梯度的葡萄糖标准溶液，如0μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml等，然后分别取这些标准溶液各1毫升，加入1毫升DNS试剂，沸水浴加热5分钟，迅速冷却至室温，加水定容至25毫升，充分混匀，以0μg/ml管为空白对照，在540nm波长下测定吸光度值，最后以葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

4、样品的测定

将待测样品溶液适当稀释后，取1毫升样品溶液加入1毫升DNS试剂，按照绘制标准曲线时的方法进行沸水浴加热、冷却、定容等操作，然后在540nm波长下测定其吸光度值，根据标准曲线计算出样品中还原糖的含量。

5、应用领域

DNS还原糖测定法广泛应用于食品分析领域，可用于测定食品中的还原糖含量，如水果、蔬菜、饮料等中的葡萄糖、果糖等还原糖的含量测定，在发酵工业中，也可用于监测发酵过程中还原糖的变化，从而控制发酵过程，还可用于农产品品质检测、生物化学研究等领域。

6、优缺点

优点：灵敏度较高，操作相对简便快速，不需要特殊的仪器设备，成本较低，该方法对多种还原糖都有响应，具有一定的通用性。

缺点：选择性不够高，会受样品中其他非还原性物质的干扰；反应条件要求较为严格，如温度、时间等需要精确控制，否则会影响测定结果的准确性；而且DNS试剂需要现配现用，不太稳定。

相关问题与解答

1、问题：DNS还原糖测定法中，如果样品颜色较深，会对测定结果产生什么影响？如何消除这种影响？

回答：如果样品颜色较深，会干扰吸光度值的测定，使测定结果偏高，可以采用活性炭脱色等方法对样品进行预处理，去除部分色素，减少颜色对测定结果的影响，也可以选择适当的参比溶液来校正背景颜色的影响。

2、问题：DNS还原糖测定法与其他还原糖测定方法相比，有哪些优势和不足？

回答：优势在于灵敏度较高、操作简便、成本较低且具有一定的通用性，不足之处在于选择性不够高，易受非还原性物质干扰，反应条件要求严格，DNS试剂不稳定等，相比之下，其他一些方法如高效液相色谱法具有更高的选择性和准确性，但仪器设备昂贵，操作复杂；而斐林试剂法虽然操作也较简便，但在灵敏度和稳定性方面可能不如DNS法。