DNS法是一种测定还原糖含量的方法，通过3,5二硝基水杨酸与还原糖反应生成棕红色物质进行比色测定。
DNS法测定还原糖的原理
在碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3氨基5硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系，因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤维素、半纤维素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。
DNS试剂的制备
| 试剂名称 | 用量 | 配制方法 |
| 3,5二硝基水杨酸（DNS） | 6.3克 | 称取一定量DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中（192g酒石酸甲钠溶于500ml水中），再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，摇匀溶解后，冷却定容至1000ml，暗处保存备用 |
| 氢氧化钠 | 262ml 2mol/L | 按照上述DNS试剂制备中的用量，与DNS共同配制DNS试剂 |
| 酒石酸钾钠 | 182克 | 加热溶解后，按照上述DNS试剂制备中的用量，与其他试剂共同配制DNS试剂 |
| 重苯酚 | 5克 | 按照上述DNS试剂制备中的用量，与其他试剂共同配制DNS试剂 |
| 亚硫酸钠 | 5克 | 按照上述DNS试剂制备中的用量，与其他试剂共同配制DNS试剂 |
葡萄糖标准曲线的制作
| 步骤编号 | 操作步骤 | 具体内容 |
| 1 | 取标准液 | 分别取葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于15 ml试管中。 |
| 2 | 补足水分 | 用蒸馏水补足至1.0ml。 |
| 3 | 加DNS试剂 | 分别准确加入DNS试剂2ml。 |
| 4 | 加热反应 | 沸水浴加热2min。 |
| 5 | 冷却定容 | 流水冷却，用水补足到15ml刻度。 |
| 6 | 测吸光度 | 在540nm波长下测定吸光度。 |
| 7 | 绘制曲线 | 根据上述测定结果，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 |
样品的测定
| 步骤编号 | 操作步骤 | 具体内容 |
| 1 | 稀释样品 | 样品液适当稀释，使糖浓度为0.11.0mg/ml。 |
| 2 | 取样加试剂 | 取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml。 |
| 3 | 加热反应 | 沸水煮沸2min。 |
| 4 | 冷却定容 | 冷却后用水补足到15ml刻度。 |
| 5 | 测吸光度 | 在540nm波长下测定吸光度。 |
| 6 | 计算含量 | 从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数，求出样品中糖含量。 |
相关问题与解答
问题1：为什么DNS法适合用于多糖水解产生的还原糖体系测定？
解答：因为DNS法显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，多糖水解后会产生多种还原糖，DNS法可以不受还原糖具体种类的影响，通过测定总的还原基团数量来反映还原糖的含量，因此适合用于多糖水解产生的还原糖体系测定。
问题2：DNS试剂需要现配现用吗？
解答：不需要，将各种成分混合均匀后，DNS试剂应贮存在棕色瓶中放置一周后备用，在贮存期内（一般为6个月），DNS试剂可保持稳定，不需要每次使用时现配。
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