ghose法dns试剂的配制

hose法DNS试剂配制需将甲液(苯酚、NaOH、亚硫酸氢钠)与乙液(酒石酸钾钠、3,5二硝基水杨酸)混合,避光保存710天

《Ghost法DNS试剂的配制》

Ghost法是一种在微生物学研究中常用的技术,用于检测细菌的运动性,DNS(二硝基水杨酸)试剂在该方法中起着重要作用,用于与特定物质反应产生颜色变化,从而帮助我们观察和分析实验结果,正确配制DNS试剂是确保Ghost法实验准确性和可靠性的关键步骤。

实验原理

DNS在碱性条件下与还原糖共热后被还原成棕红色的3 氨基 5 硝基水杨酸,在一定范围内,颜色的深浅与还原糖的含量成正比,在Ghost法中,通过观察DNS与待测物质反应后的颜色变化,可以间接判断细菌的运动情况以及相关代谢产物的产生。

ghose法dns试剂的配制

试剂与材料准备

(一)试剂

  1. 酒石酸钾钠:分析纯,用于提供稳定的碱性环境。
  2. 3,5 二硝基水杨酸:分析纯,是DNS试剂的主要有效成分。
  3. 氢氧化钠:分析纯,用于调节溶液的pH值至碱性。
  4. 苯酚:分析纯,有助于增加试剂的稳定性和显色效果。
  5. 无水亚硫酸钠:分析纯,可防止DNS被氧化。
  6. 蒸馏水:用于溶解和稀释各种试剂。

(二)材料

  1. 电子天平:精确称量试剂,精度至少达到0.0001g。
  2. 容量瓶:用于准确配制一定体积的溶液,如500mL容量瓶。
  3. 棕色试剂瓶:DNS试剂见光易分解,需用棕色瓶保存。
  4. 玻璃棒:用于搅拌,加速试剂溶解。
  5. 烧杯:用于溶解试剂。

DNS试剂的配制步骤

(一)称量试剂

按照以下表格所示的质量,使用电子天平准确称取各种试剂:

试剂名称 称取质量(g)
3,5 二硝基水杨酸 0g
苯酚 0g
无水亚硫酸钠 8g
酒石酸钾钠 0g
氢氧化钠 0g

(二)溶解试剂

  1. 将称取的3,5 二硝基水杨酸、苯酚、无水亚硫酸钠放入500mL烧杯中,加入少量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,使其初步溶解,由于这些试剂在水中的溶解度相对较小,搅拌过程可能需要一些时间。
  2. 在另一烧杯中,称取酒石酸钾钠,加入适量蒸馏水搅拌溶解,酒石酸钾钠在水中的溶解度较大,较易溶解。
  3. 将氢氧化钠加入上述酒石酸钾钠溶液中,边加边搅拌,注意控制搅拌速度,避免溶液溅出,氢氧化钠溶解时会放出大量热量,要小心操作。

(三)混合溶液

将步骤(二)中初步溶解的3,5 二硝基水杨酸、苯酚、无水亚硫酸钠混合液缓慢倒入酒石酸钾钠和氢氧化钠的混合溶液中,边倒边搅拌,此时会观察到溶液颜色逐渐加深,这是因为各种试剂发生了复杂的化学反应。

(四)定容

将混合后的溶液全部转移至500mL容量瓶中,用蒸馏水冲洗烧杯和玻璃棒多次,将洗涤液一并倒入容量瓶,然后继续向容量瓶中加入蒸馏水,直至液面接近容量瓶的刻度线,用滴管逐滴加入蒸馏水,使液面恰好与刻度线相切,盖好容量瓶的瓶塞,轻轻颠倒容量瓶数次,使溶液混合均匀。

ghose法dns试剂的配制

(五)保存

将配制好的DNS试剂转移至棕色试剂瓶中,贴上标签,注明试剂名称、配制日期、配制者姓名等信息,DNS试剂应存放在阴凉、避光的地方,以防止试剂分解失效。

注意事项

  1. 称量试剂时要准确,特别是3,5 二硝基水杨酸等关键试剂,其用量的准确性直接影响试剂的质量和实验结果。
  2. 溶解试剂过程中,要按照正确的顺序进行操作,先溶解难溶试剂,再混合其他试剂。
  3. 氢氧化钠具有强腐蚀性,操作时要小心,避免接触皮肤和眼睛,如不慎接触到,应立即用大量清水冲洗,并寻求医疗帮助。
  4. DNS试剂配制过程中,溶液的温度可能会升高,要注意防止烫伤。
  5. 配制好的DNS试剂要及时保存,避免长时间暴露在空气中和光照下,否则会影响试剂的性能。

相关问题与解答

(一)问题1:DNS试剂配制时,为什么需要用棕色试剂瓶保存?

答:DNS试剂中的3,5 二硝基水杨酸在光照条件下容易发生分解反应,导致试剂的有效成分减少,影响其与还原糖的显色反应,棕色试剂瓶可以有效地阻挡光线,减少试剂的光解,从而延长试剂的保存时间和保持其性能稳定。

(二)问题2:如果在配制DNS试剂过程中,氢氧化钠加入速度过快,会对试剂有什么影响?

答:如果氢氧化钠加入速度过快,由于其溶解时会放出大量热量,会使溶液温度迅速升高,高温可能会导致部分试剂分解,影响试剂的质量;过高的温度会使溶液剧烈沸腾,容易造成溶液溅出,不仅会使试剂损失,还可能对操作人员造成伤害,快速升温还可能影响试剂之间的充分混合和反应,导致配制的

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