dns酶终止液的配置

S酶终止液配置需称取3,5二硝基水杨酸等试剂,按特定顺序溶解、定容,避光保存

S酶终止液是用于终止酶促反应并测定还原糖含量的试剂,其主要成分为3,5二硝基水杨酸(DNS),在碱性条件下与还原糖共热生成棕红色化合物,可用于比色法测定,以下是DNS酶终止液的配置方法及相关说明:

DNS试剂的配制方法

不同来源的DNS试剂配方略有差异,但核心成分和配制原则基本一致,以下是几种常见的配制方法:

dns酶终止液的配置

配方来源 3,5二硝基水杨酸(g) 氢氧化钠(g) 酒石酸甲钠/酒石酸钾钠(g) 苯酚(g) 无水亚硫酸钠(g) 定容体积(mL) 其他条件
轻工业部标准 10 ± 0.1 10 200 2 5 1000 50℃水浴搅拌,避光保存7天
农业部标准 15 2ml(0.2g/ml) 0 5 5 1000 45℃水浴,避光保存7天
简化版 03 1 2 5 100 室温保存,控制温度≤50℃
大规模配制 5 1000ml(约100g) 0 0 0 10000 45℃水浴,避光保存

配制步骤(以轻工业部标准为例)

  1. 溶解DNS:称取10g 3,5二硝基水杨酸,加入约600mL蒸馏水,逐渐加入10g氢氧化钠,50℃水浴中磁力搅拌至完全溶解。
  2. 添加辅助试剂:依次加入200g酒石酸甲钠、2g重蒸苯酚和5g无水亚硫酸钠,搅拌至澄清。
  3. 定容与保存:冷却至室温后定容至1000mL,用滤纸过滤,储存于棕色试剂瓶中,避光放置7天后使用。

关键注意事项

  1. 试剂顺序与温度控制
    • 氢氧化钠需缓慢加入DNS溶液中,避免局部过碱导致沉淀。
    • 加热时温度不超过50℃,防止DNS分解或形成难溶性沉淀。
  2. 储存条件
    • DNS试剂需避光保存(棕色瓶),配制后需放置7天以稳定显色反应。
    • 有效期通常为6个月,过期后需重新配制。
  3. 安全性
    • DNS具有腐蚀性,操作时需戴手套和护目镜。
    • 废液需按化学试剂处理规范回收。

相关问题与解答

问题1:DNS试剂配制后为何需避光保存7天?

解答:DNS试剂中的3,5二硝基水杨酸在强碱条件下会逐渐形成稳定的醌式结构,避光保存7天可确保试剂充分反应并稳定,避免显色偏差。

问题2:如何判断DNS试剂是否失效?

解答:可通过空白对照实验验证:取1mL蒸馏水代替反应液,加入DNS试剂后沸水浴显色,若空白组吸光度显著升高(如超过0.1),则表明试剂失效,需重新配制。

dns酶终止液的配置

通过以上方法,可准确配制DNS酶终止液,并用于还原糖含量的测定,实际应用中需根据实验需求选择合适配方,并

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