S酶终止液配置需称取3,5二硝基水杨酸等试剂,按特定顺序溶解、定容,避光保存
S酶终止液是用于终止酶促反应并测定还原糖含量的试剂,其主要成分为3,5二硝基水杨酸(DNS),在碱性条件下与还原糖共热生成棕红色化合物,可用于比色法测定,以下是DNS酶终止液的配置方法及相关说明:
DNS试剂的配制方法
不同来源的DNS试剂配方略有差异,但核心成分和配制原则基本一致,以下是几种常见的配制方法:

| 配方来源 | 3,5二硝基水杨酸(g) | 氢氧化钠(g) | 酒石酸甲钠/酒石酸钾钠(g) | 苯酚(g) | 无水亚硫酸钠(g) | 定容体积(mL) | 其他条件 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 轻工业部标准 | 10 ± 0.1 | 10 | 200 | 2 | 5 | 1000 | 50℃水浴搅拌,避光保存7天 |
| 农业部标准 | 15 | 2ml(0.2g/ml) | 0 | 5 | 5 | 1000 | 45℃水浴,避光保存7天 |
| 简化版 | 03 | 1 | 2 | 5 | 100 | 室温保存,控制温度≤50℃ | |
| 大规模配制 | 5 | 1000ml(约100g) | 0 | 0 | 0 | 10000 | 45℃水浴,避光保存 |
配制步骤(以轻工业部标准为例)
- 溶解DNS:称取10g 3,5二硝基水杨酸,加入约600mL蒸馏水,逐渐加入10g氢氧化钠,50℃水浴中磁力搅拌至完全溶解。
- 添加辅助试剂:依次加入200g酒石酸甲钠、2g重蒸苯酚和5g无水亚硫酸钠,搅拌至澄清。
- 定容与保存:冷却至室温后定容至1000mL,用滤纸过滤,储存于棕色试剂瓶中,避光放置7天后使用。
关键注意事项
- 试剂顺序与温度控制:
- 氢氧化钠需缓慢加入DNS溶液中,避免局部过碱导致沉淀。
- 加热时温度不超过50℃,防止DNS分解或形成难溶性沉淀。
- 储存条件:
- DNS试剂需避光保存(棕色瓶),配制后需放置7天以稳定显色反应。
- 有效期通常为6个月,过期后需重新配制。
- 安全性:
- DNS具有腐蚀性,操作时需戴手套和护目镜。
- 废液需按化学试剂处理规范回收。
相关问题与解答
问题1:DNS试剂配制后为何需避光保存7天?
解答:DNS试剂中的3,5二硝基水杨酸在强碱条件下会逐渐形成稳定的醌式结构,避光保存7天可确保试剂充分反应并稳定,避免显色偏差。
问题2:如何判断DNS试剂是否失效?
解答:可通过空白对照实验验证:取1mL蒸馏水代替反应液,加入DNS试剂后沸水浴显色,若空白组吸光度显著升高(如超过0.1),则表明试剂失效,需重新配制。

通过以上方法,可准确配制DNS酶终止液,并用于还原糖含量的测定,实际应用中需根据实验需求选择合适配方,并
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